Proteómica es entender aún más el mecanismo de las actividades de la vida y el mecanismo molecular de la aparición de la enfermedad desde el nivel del proteoma, y ​​en la investigación de la proteómica, la extracción de proteínas es uno de los aspectos más básicos y más críticos. Tris es un agente común en el experimento de extracción de proteína vegetal, los métodos incluyen tris-hcl, tris-fenol, tris-acetona-fenol. Estos métodos se resumen en este artículo.

Tris-hcl

El efecto de tris-hcl en la extracción de proteína fue mejor que el de tca-acetona. La extracción de proteína tca-acetona es desigual en la región de pequeño peso molecular, las manchas de proteínas no son claras, las rayas horizontales y las rayas verticales son relativamente serias, mientras que la tris-hcl supera las deficiencias anteriores y separa la proteína ácida que es difícil de separar por tca -acetona. Además de la separación de proteínas de peso molecular más moderado, tris-hcl también podría obtener una gran cantidad de peso molecular alto y proteína de bajo peso molecular.

El método tris-hcl tiene las ventajas de tiempo de extracción corto, costo moderado, paso de extracción simple, menor pérdida de proteína y resultado experimental reproducible.

Tris-fenol

El tris-fenol utiliza las características del fenol tris-saturado: el fenol es un buen disolvente para la proteína, la proteína y los lípidos se disuelven en fenólico en la preparación de la muestra, mientras que la sal, ácido nucleico, polifenoles y polisacáridos y otras sustancias solubles están en La fase acuosa; Aumentando la fuerza centrífuga y el tiempo de centrifugación, es posible dejar la densidad de azúcar en la capa superior del sobrenadante tanto como sea posible; Proteína en fase fenólica podría precipitar a través de la solución metanólica de acetato de amonio, y luego la limpieza de la proteína con acetona fría varias veces, pigmentos e iones de amonio y otras impurezas pueden ser eliminados.

Este método es muy eficaz en el manejo de muestras de plantas que contienen una gran cantidad de sustancias interferentes, pero es relativamente complejo y consume mucho tiempo.

Tris - acetona - fenol

La combinación de tca-acetona y tris-fenol para la extracción de proteína, tiene las ventajas de la precipitación de tca-acetona y tris-fenol. El tca residual se lava primero con una solución de metanol que contiene acetato de amonio y se ajusta el pH de la solución por encima de 7,0, y se usa una mezcla de fenol y sds para disolver la proteína. Fenol-sds extracción combinada es más eficaz que el fenol, la extracción de tampón sds solo. El método tris-acetona-fenol ha logrado muy buenos resultados en la extracción de proteínas de muchas plantas, y el fondo y la tira en el patrón electroforético son muy claras, puede ser ampliamente utilizado en hojas de plantas y extracción de proteínas de frutas.

El método de extracción es muy ahorro de tiempo, el tiempo de extracción total es de aproximadamente 1h, mucho menor que el del método tradicional.