La enzima CELI es una nucleasa específica que reconoce específicamente tanto monocatenario como bicatenario. En la actualidad, la enzima CELI se extrae principalmente del apio. Esta enzima puede escindir específicamente bases que no coinciden y se usa ampliamente en el campo de la detección de mutaciones. Las teorías tradicionales creen que la actividad catalítica de la enzima solo requiere Mg ²⁺ y Zn ²⁺ . Ditiotreitol, nombre en inglés DL-Ditiotreitol, abreviado como DDT , fórmula molecular es C ₄ H ₁₀ O ₂ S ₂ , peso molecular es 154,25, a menudo utilizado como agente reductor, tiene efecto antioxidante. Hoy presentaré la aplicación de DTT en la preparación del tampón de digestión de enzimas de la familia CELI.

El tampón de digestión enzimática de la familia CELI está compuesto por DTT, BSA (albúmina de suero bovino), Triton X-100 al 0,02 %, KCl 0,1 M y tampón HEPES, entre los que se encuentran:

El tampón de digestión enzimática de la familia CELI que contiene DTT está compuesto por el tampón del kit Mutation Detection Kit-S100 y DTT. El tampón del kit Mutation Detection Kit-S100 es un producto de Universal Gene Corporation, el número de catálogo es 706025;

La concentración de DTT en el tampón de digestión de enzimas de la familia CELI es 0,01-0,5 mM, 0,5-10 mM o 0,01-6 mM;

La concentración de BSA es de 2ug/ml;

La concentración de tampón HEPES es 0,1 M y el PH es 7,5.

La nueva sustancia catalíticamente activa DTT puede mejorar aún más la actividad de CELI, especialmente para la detección de mutaciones de baja abundancia. Comparado con el método tradicional de digestión enzimática, el método de la presente invención es más sensible y la concentración final de DTT está en el rango de 0,01-10 mM. Ambos pueden mejorar la sensibilidad de detección de la enzima CELI y la enzima CELII. La detección de mutantes desconocidos de baja abundancia, como cierto gen del cáncer, tiene un buen efecto de detección. Especialmente cuando la plataforma de tecnología TILLING detecta poblaciones mutagénicas, tiene ventajas obvias. No solo simplifica los pasos de purificación de PCR, sino que también mejora la resolución de detección.

Referencias