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enzima relacionada con el ADN biosensor electroquímico con tampón de mops 2019-05-17 11:22:18

La transmisión estable del material genético es la base de la reproducción de la vida. La replicación y distribución precisas del ADN es la base de la transferencia de material genético, y también son los dos eventos biológicos centrales del ciclo celular. Las enzimas relacionadas con el ADN son uno de los factores más importantes en el proceso de replicación. están involucrados no solo en el proceso de la síntesis genómica normal de ADN, sino también en varios procesos de reparación con daños de ADN. una variedad de mutaciones genéticas de enzimas relacionadas con el ADN están asociadas con ciertos tumores y enfermedades genéticas. Los biosensores electroquímicos de enzimas relacionadas con el ADN facilitan la detección. El ácido 3- (n-morfolino) propanosulfónico (trapeadores) es un tampón biológico de uso común.


Recientemente, los investigadores [1] han proporcionado un biosensor electroquímico enzimático relacionado con ADN basado en nanoclusters de ADN-cobre con buena especificidad, alta sensibilidad, velocidad de detección rápida, resultados precisos y confiables y bajo costo. Los pasos específicos son los siguientes:


(1) electrodo 1: mezcla sulfhidrilo dna (2,5 ~ 7,5 μl, 0,25 ~ 0,75 μm) y tris (2-carboxietil) fosfina (tcep) (0,5 ~ 1,5 μl, 0,5 ~ 1,5 mm), uniformemente a 27 ~ 42 ° C durante 30 ~ 90 minutos, deje caer sobre la superficie de un electrodo de oro desnudo limpio (au) y lave el electrodo con agua diluida.
(2) electrodo 2: tome 1 ~ 3 μl de tampón de mops (mops de 10 mm, 150 mm de nácar, ph 7.6), 0.5 a 1.5 μl de 5 × tdt buffer, y dttp (0.5 ~ 1.5 μl, prepare la solución de reacción tdt con 5 ~ 15mm) y tdt (0.1 ~ 1.5μl, 5 ~ 15u / ml), controle el volumen total a 2.5 ~ 7.5μl, mezcle bien, caiga sobre la superficie del electrodo 1 y colóquelo a 27 ~ 42 ° C 0.5 ~ 1.5 h, lavar el electrodo con agua diluida.

(3) electrodo 3: se agregó gota a gota a la superficie del electrodo del electrodo 2 (2.5 ~ 7.5 μl, 0.5 ~ 1.5 mm), y se incubó a temperatura ambiente durante 10 ~ 30 minutos, y el electrodo se amortiguó lentamente con agua destilada. luego, se añadió gota a gota solución de ascorbato de sodio (2,5 ~ 7,5 μl, 1 ~ 3 mm) a la superficie del electrodo, y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 10 ~ 30 minutos, y el electrodo se lavó lentamente con agua destilada.


En comparación con el proceso anterior, el sensor tiene las siguientes ventajas:
(1) alta sensibilidad. la respuesta actual del sensor al límite de detección de tdt es 0.0008u / ml, el límite de detección de la concentración de exo i es de 0.002u / ml, lo que indica que el sensor logra una detección altamente sensible de tdt y exo i.
(2) alta especificidad. otras enzimas comunes tales como ureasa (ureasa), acetilcolinesterasa (dolor), uracil-dna glicosilasa (udg), histona acetilasa (hat), proteína quinasa (pka), fosfatasa alcalina (alp), no tiene interferencia con el tdt y la exo i Sistemas de detección de actividad.
(3) Detección de inhibidores. a través de la respuesta electroquímica del biosensor electroquímico a la actividad de la enzima, se puede lograr la detección del inhibidor tdt pirofosfato de sodio (pp) y el inhibidor de polietilenglicol (peg) exo i, y la correlación de la respuesta electroquímica del sensor con inhibidores enzimáticos Puede ser obtenido..
(4) los reactivos están en una cantidad pequeña, la velocidad de detección es rápida y el costo es bajo.

En resumen, el biosensor electroquímico de enzimas relacionadas con el ADN tiene las ventajas de alta sensibilidad, buena selectividad, operación simple, análisis rápido y operación fácil, y puede realizar la detección de baja concentración tdt y exo i, y tiene una buena perspectiva de aplicación.


referencia

[1] Biosensor electroquímico de enzima relacionado con ADN basado en nanoclúster de ADN-cobre y su aplicación. cn109613096a, 2019-01-21.


editado por suzhou yacoo science co., ltd .
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