banner
la concentración de inductor iptg, cuanto más alto mejor? 2017-10-13 17:45:06

en los experimentos de biología molecular, inductor iptg para la expresión de proteínas no es nuevo para todos. es un imitador molecular de la alolactosa que desencadena la transcripción del operón lac e induce la expresión de la proteína donde el gen está bajo el control del operón lac.


pero en el uso de iptg ( isopropil \ beta - d - 1 - tiogalactopiranósido ), ¿es mayor la concentración siempre mejor?


primero, revisemos el principio inductor de iptg.


la gran mayoría de los genes de los procariotas se disponen en un grupo de acuerdo con las relaciones funcionales y se concentran en los cromosomas para formar una unidad de transcripción-el operón. lactón de e. coli contiene tres genes estructurales z, yy a, que codifican la β-galactosidasa, la permeasa y la transacetilasa, respectivamente. además, está el gen regulador: secuencia de manipulación (operador), secuencia de inicio p (promotor); mientras que i (que codifica el represor lac) no pertenece al operón de la lactosa.


el represor lac es una proteína estructural cuaternaria con cuatro subunidades idénticas y tiene un sitio que se une al inductor. en ausencia de lactosa, el operón lac está en un estado represivo y el represor lac se une al operador (o), impidiendo que la polimerasa rna se una a la secuencia p, impidiendo la vía transcripcional, inhibiendo de este modo la iniciación de la transcripción. cuando el inductor (tal como reactivo iptg ) está presente, el inductor se une a la proteína represora y cambia su conformación, haciendo que el represor se disocie del operador (o), la polimerasa rna ya no se vea obstaculizada, el promotor p inicia la transcripción.

en este sistema de operón, el inductor real no es lactosa. la lactosa entra en las células, y es catalizada por la β-galactosidasa en un inductor fisiológico de la alolactosa. en el experimento, iptg ( glucosinolatos de isopropilo galactosa glucosido ) son ampliamente utilizados porque es un fuerte inductor que no se ve afectado por el metabolismo bacteriano y es muy estable.


entonces volvemos a la pregunta anterior: la concentración de iptg, ¿es mayor cuanto mejor?


la respuesta no es realmente!


(1) iptg tiene cierta toxicidad a las células, la concentración alta mataría a las células;

(2) en general, esperamos que la proteína soluble pueda expresarse lo más posible, mientras que un gran número de inclusión se formará si la concentración de iptg es demasiado alta, entonces se reduce la cantidad de proteína soluble.


por lo tanto, la concentración más apropiada de iptg no suele ser alta.


el nivel de expresión del gen diana se ve afectado por factores tales como la concentración del inductor, la temperatura de inducción, el tiempo de inducción y así sucesivamente. por lo tanto, en la expresión y purificación de una proteína desconocida, es mejor estudiar los factores relevantes, incluyendo la concentración de inductor iptg ( cas 367-93-1 ), con el fin de seleccionar las condiciones adecuadas para obtener los mejores resultados experimentales.



Publicación anterior Siguiente post

Derechos de autor © Suzhou Yacoo Science Co., Ltd. Todos los derechos reservados

Servicio en línea

service

Servicio en línea

Contáctanos ahora