ecl, dab y nbt / métodos colorimétricos bcip se usan muy comúnmente en experimentos bioquímicos tales como inmunohistoquímica (ihc), inmunocitoquímica (icc) y western blot (wb).

¿sabes cuál es la diferencia entre ellos?

ecl - quimioluminiscencia mejorada

ecl generalmente contiene luminol, h2o2, potenciadores luminosos y otras sustancias. el luminol es oxidado por hrp y h2o2 para producir fluorescencia, y este proceso se ve reforzado por el potenciador luminiscente.

el potenciador luminiscente juega un papel clave en el sistema, el potenciador luminiscente ideal debe ser (1) sensible a la luz, (2) estabilidad luminosa, y (3) bajo fondo o sin fondo.

dab - 3,3'-diaminobenzidine

dab es un sustrato cromogénico para las peroxidasas, que pierde electrones en presencia de h2o2 y exhibe cambios de color y acumulación para formar un producto insoluble de color tostado. la reacción es la siguiente:

hrp + h ₂ o ₂ + dab → hrp + h ₂ o + punto oxidado ↓

el método tiene las ventajas de una buena especificidad, un rendimiento estable y una operación conveniente. es adecuado para hibridación de proteínas e inmunoquímica.

bcip-- 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate

nbt / bcip es una de las mejores combinaciones de sustrato para la fosfatasa alcalina (ap). bajo la catálisis de ap, bcip se hidroliza para producir un producto reactivo fuerte, que reacciona con nbt para formar productos químicos insolubles de azul oscuro a azul violeta. el kit puede usarse para la coloración enzimática de experimentos de ihc y wb en sistemas de fosfatasa alcalina.

tabla 1. enzima correspondiente y reacción de ecl, nbt / bcip y dab