Acridina éster (NSP-DMAE-NHS), polvo amarillo, CAS No.: 194357-64-7 es un importante reactivo quimioluminiscente con un alto rendimiento cuántico，condiciones suaves de reacción, buena reproducibilidad y la alta eficiencia de quimioluminiscencia 。 NSP-DMAE-NHS es ampliamente utilizado en los campos de la inorgánicas de compuestos orgánicos, monitoreo ambiental, biológica y farmacéutica, análisis, etc. Además, también es ampliamente utilizado para la detección sensible y el diagnóstico de muchos tipos de enfermedades.

En términos de diagnóstico in vitro, acridina éster(NSP-DMAE-NHS) compuestos son muy aptos para el etiquetado de las hebras de ADN para hacer la quimioluminiscencia de sondas de ADN. En este artículo se presenta un método de NSP-DMAE-NHS etiquetado de los ácidos nucleicos.

El ácido nucleico es el más importante ingrediente en todas las moléculas biológicas, ampliamente existe en todos los animales y células vegetales, microorganismos, el ácido nucleico se divide en dos categorías: el ácido desoxirribonucleico (ADN) y ácido ribonucleico (ARN). La investigación médica moderna resultados muestran que la aparición de muchas enfermedades, como el cáncer y enfermedades genéticas, está relacionado con la mutación del ADN, y muchas enfermedades infecciosas son causadas por virus, patógenos o parásitos en el medio ambiente. Por lo tanto, el análisis de virus específicos de la secuencia de ADN es propicio para el control de la situación de la epidemia.

En la hibridación de ácidos nucleicos análisis, la preparación de profesionales altamente específico y sensible sondas marcadas es la clave para el éxito de hibridación de ácidos nucleicos análisis. Acridina éster(NSP-DMAE-NHS) derivados pueden ser directamente la etiqueta de sondas de ácidos nucleicos sin catalizador y la luminiscencia rendimiento cuántico no está afectado. Además, bajo ciertas condiciones, de la etiqueta de acridina éster(NSP-DMAE-NHS) en el unhybridized una sola cadena de ADN es la hidrólisis destruido, y sólo el doble cadena NSP-DMAE-NHS formado por la hibridación puede producir la quimioluminiscencia, y todo el proceso de hibridación pueden ser controlados sin aislamiento.

Este método de etiquetado de ácido nucleico con acridina éster(NSP-DMAE-NHS) comprende los siguientes pasos :

(1) la protección de la 5-esima de la terminal y el 3'el terminal de una sonda de ADN;

(2) el etiquetado de acridina ester: la habilitación de 25mm NHS acridina éster se disuelva en el DMSO, la preparación de 1M de una solución tampón HEPES (PH=8.0), de acuerdo a la condición de que la relación molar de la sonda de ácido nucleico para el NHS acridina éster es de 1 a 5, la realización de la adición de la solución tampón HEPES, y la realización de la reacción a 37 DEGC para 1h;

(3) la realización de HPLC de la purificación. El método tiene los efectos beneficiosos que de acuerdo a un método ordinario, uno de acridina éster pueden ser etiquetadas en el 5' terminal de la sonda de ácido nucleico.

El método de manera creativa las etiquetas de acridina éster(NSP-DMAE-NHS) en los dos extremos, y mejorar aún más la sensibilidad de la detección.

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Referencia: Método de NSP-DMAE-NHS etiquetado de ácido nucleico CN109852669A