Las proteínas en los alimentos o los ingredientes de los piensos a menudo cambian de estructura y solubilidad debido al tratamiento térmico o la reacción química durante el proceso de mecanizado, lo que resulta en una baja solubilidad.

Los métodos de detección de proteínas descritos en las normas nacionales incluyen principalmente tres tipos: método kjeldahl, espectrofotometría y método de combustión. El método biuret, el método BCA, el método azul de coomassie, el método lowry y el método ultravioleta también se usan a menudo en el laboratorio bioquímico. Los detalles son los siguientes:

tabla 1. métodos de detección de proteínas

por lo tanto, existe una necesidad urgente de desarrollar un ensayo que pueda garantizar la precisión de los resultados de la medición, y que también tenga un tiempo de medición corto y una amplia gama de objetivos de medición aplicables (especialmente, puede usarse directamente para medir el contenido de proteína en las muestras) que contiene proteínas poco solubles).

los investigadores [1] desarrollaron un nuevo método que incluye los siguientes pasos:

(1) reactivo a: disolución de alquil sulfato de sodio lineal e hidróxido de sodio en agua a una concentración molar de 45 ~ 100 mm y 150 ~ 300 mm, respectivamente; reactivo b: sulfato de cobre o sulfato de cobre hidratado, tartrato de sodio e hidróxido de sodio soluble en agua a concentraciones molares de 5 ~ 10 mm, 15 ~ 30 mm y 150 ~ 750 mm;

(2) preparación de muestras: usando agua libre de proteínas o tampón como muestra en blanco; disolviendo albúmina de suero bovino en agua o Ácido 3-morfolinapropanosulfónico (trapeadores) tamponan y ajustan la concentración de la proteína, obteniendo así una serie de soluciones que tienen una concentración de proteína que varía de 0.2 mg / ml a 30 mg / ml como una muestra de proteína estándar; dispersar el material que contiene proteínas para analizar en agua o tampón, y opcionalmente mediante procesamiento de dilución para preparar una muestra para analizar;

(3) mezclar el reactivo a con una muestra en blanco, una muestra de proteína estándar y una muestra a analizar, respectivamente, para obtener el reactivo correspondiente a una mezcla, en donde el contenido de proteína en el reactivo una mezcla de la muestra a analizar cumple con Requisito de rango lineal. y cada reactivo se calienta una mezcla en un baño de agua a una temperatura de 90 ~ 100 ° C, y luego se enfría a temperatura ambiente;

(4) mezclar cada reactivo una mezcla con el reactivo b para obtener una mezcla de reactivo b correspondiente, y calentar cada mezcla de reactivo b en un baño de agua a una temperatura de 50 ~ 70 ° C, y enfriar a temperatura ambiente;

(5) filtrar cada una de las mezclas de reactivo b, utilizando la mezcla de reactivo b de la muestra en blanco enfriada como referencia, y medir la mezcla de reactivo b de la muestra de proteína estándar enfriada y el reactivo b de la muestra a analizar a 540 nm usando un espectrofotómetro.

(6) de acuerdo con el contenido de proteína de la muestra cuasi-proteica, la relación entre el contenido de proteína y la absorbancia se obtiene mediante un ajuste lineal, y se calcula el contenido de proteína en la muestra a analizar.

El método de detección de proteínas requiere un tiempo de detección más corto, aumenta la solubilidad de las proteínas insolubles, tiene una amplia gama de aplicaciones, resultados de medición precisos, amplio rango lineal, alta sensibilidad, alta precisión y buena reproducibilidad. Además, el método de prueba es compatible con los equipos y accesorios de medición de alto rendimiento, y puede detectar rápidamente grandes cantidades de muestras, lo que lo hace más adecuado para procesos industriales a gran escala.

referencia

Método de detección de proteínas y kit de detección de proteínas. cn105987884b, 2015-03-03.

editado por suzhou yacoo science co., ltd.