(1) la preparación deHepes

el sintéticoruta

• síntesis del compuesto 1

el hexahidrato de piperazina se usó como materia prima, se disolvió en etanol para formar una solución transparente de color, luego se añadió óxido de etileno mientras se sometía a reflujo a 80 ° c. una vez que se completa la reacción, el etanol se separó por destilación a presión reducida, y el residuo se separóy se purificó por fraccionamiento al vacío, se recogió destilado de 125 ~ 127 ° c (compuesto 1).

• síntesis del compuesto 2

primero, se añadieron al matraz sulfito de sodio anhidro y agua, la mezcla se calentó en un baño de agua. cuando la temperatura alcanzó 90 ° c, 1,2-dicloroethse añadió gota a gota, y se continuó el reflujo. el líquido de reacción se concentró a presión reducida en un baño de agua de 70 ° C hasta un sólido blanco, el sólido se suspendió en etanol al 95%, y la mezcla se calentó a reflujo y se filtró para eliminar los insolubles. el sobrenadante se dejó reposar a 0 ° C durante la noche. cristales blancos en forma de escamas se recogieron mediante filtración por succión usando un embudo Buchner.

• sintetizars de hepes (cas 7365-45-9)

el compuesto 1, 2 y el agua se colocaron en un matraz, se agitaron en una solución transparente incolora (ph & gt; 13) y se incubaron externamente a 110 ° C ~ 115 ° c en un baño de aceite. agitar durante 20 minutos y el pH de la solución de reacción disminuyó gradualmente a 9, y se añadió 5n de hidróxido de sodio gota a gota amantenerel pH de la solución de reacción entre 9 y 10. cuando el ph de la solución de reacción no disminuye, se detiene el hidróxido de sodio y se continúa el reflujo hasta que se completa la reacción.

la solución de reacción enfriada se diluyó luego con agua y se purificó mediante una columna de resina de intercambio iónico [h +] *. la solución recolectada obtenida por cromatografía was concentrado bajo presión reducida, y luego filtrado y evaporado. la solución incolora transparente transparente se concentró adicionalmente en un jarabe espeso, se vertió en etanol al 95% hirviendo, se ajustó a ph 5 con ácido acético glacial y se añadió etanol absoluto para precipitar cristales blancos, se enfrió de forma natural a temperatura ambiente y se colocó a 0 ° c por la noche.

los cristales se recogieron mediante filtración por succión usando un embudo Buchner y se lavaron con etanol helado. los cristales lavados se suspendieron en etanol al 95%, se calentaron a 75 ° C y se añadió agua gota a gota para disolverlos por completo. después de la filtración en caliente, el sobrenadante se agrega con etanol absoluto, y se enfría de forma natural bajo agitación para precipitar los cristales blancos en una forma suelta. dejar a 0 ° c overnight.

los cristales fueron recolectados por filtración por succiónusando un embudo Buchner, se lavó con etanol anhidro helado y se secó a 80 ° C para dar el producto.

(2) preparación del buffer hepes

dependiendo de la aplicaciónLa lication, hepes + naoh y hepes + salt se usan comúnmente:

• hepes + naoh (500 ml): 119.15 g de hepes se disuelven en 400 ml de agua destilada, agregue 0.5 ~ 1m de solución acuosa Naoh para ajustar el ph, y luego hágalo 500 ml con agua destilada.
• hepes + sal (500m)l): hepes 6,5 g, nacl 8,0 g, na2hpo4 • 7h2o 0,198 g, se ajustó el ph con 0,5 m de solución acuosa Naoh y se hizo 500 ml.

C.ADe acuerdo con el informe de lepe-zuniga et al., hepes tiene una fototoxicidad cuando se expone a la luz ambiental por la producción de peróxido de hidrógeno. por lo tanto, se recomienda encarecidamente mantener las soluciones que contienen hepes en la oscuridad tanto como sea posible.