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El principio y precauciones de tiazol azul (MTT) colorimetría 2020-10-28 14:39:59

1 Qué es tiazol azul ( MTT )

Tiazol Azul, número cas 298-93-1, fórmula molecular c 18 h dieciséis BrN 5 S, es un amarillo o amarillo anaranjado polvo de fusión punto: 195 ° C (descomposición). ligeramente soluble en metanol, pero difícilmente soluble en agua o etanol. no puede disolverse completamente con éter, acetona o acetato de etilo. disuelto en DMSO. a menudo se formula como 5 mg / ml stock solución.

 

2 principio de detección de tiazol azul (MTT) método colorimétrico

Tiazol azul (MTT) la colorimetría es un método para detectar la supervivencia y el crecimiento celular. El principio del MTT experimento es que el succinato deshidrogenasa en las mitocondrias de las células vivas puede reducir el MTT exógeno a cristal azul-violeta insoluble en agua formazan (Formazan) y depositarlo en las células, mientras que las células muertas no tienen tal función. Dimetilo sulfóxido (DMSO) se puede disolver formazan en las células, y su valor de absorción de luz se mide a 490 nm longitud de onda con un ligado a enzimas inmunoensayo, que indirectamente puede reflejar el número de células vivas. El cantidad de MTT La formación de cristales en un cierto rango de números de células es proporcional al número de células. de acuerdo con el valor de absorbancia medido (OD valor), se juzga el número de células vivas El mayor es el valor de od, más fuerte es la actividad celular (si se mide la toxicidad del fármaco, menor es la toxicidad del fármaco). Este El método ha sido ampliamente utilizado en la detección de actividad de algunos factores biológicamente activos, a gran escala antitumoral detección de drogas, prueba de citotoxicidad y determinación de radiosensibilidad tumoral. se caracteriza por una alta sensibilidad y economía.

3aplicación de Tiazol azul (MTT)

MTT se utiliza normalmente para la proliferación celular, la determinación de la viabilidad celular y la administración de fármacos (incluidos otros tratamientos, como la exposición a la radiación) para determinar la toxicidad de las células cultivadas in vitro.

4. El ventajas y desventajas de tiazol azul (MTT) colorimetría

(1) Ventajas: es simple, rápido, económico y no utiliza isótopos.

(2) Desventajas: El formazan producto producido por la reducción de MTT es insoluble en agua y debe disolverse antes de la detección. el aumento de la carga de trabajo también afectará la precisión de los resultados experimentales y el disolvente orgánico que disuelve formazan también es perjudicial para la salud de los experimentadores.

5.Precauciones para tiazol azul (MTT)

(1) en el proceso de preparación y almacenamiento, es mejor envolver el recipiente con aluminio papel de aluminio.

(2) El preparado MTT debe ser estéril y MTT es muy sensible a las bacterias.

(3) MTT Por lo general, es mejor estar preparado de inmediato. es efectivo dentro de las dos semanas posteriores a la filtración a 4 ° cy protegido de ligero, o se formula como 5 mg / ml y almacenado a -20 ° c para almacenamiento a largo plazo. evite congelar y descongelar repetidamente. es mejor empacar en pequeñas dosis. envuélvalo en un a prueba de luz bolsa o papel negro o papel de aluminio para evitar la descomposición de la luz. Cuando MTT se vuelve gris-verde, no se puede volver a utilizar

(4) MTT es cancerígeno, utilícelo con cuidado y si posible, es mejor usar guantes de película transparente. Generalmente, el MTT concentración en esto método es 5 mg / ml. Por lo tanto, usted puede pesar MTT 0.5g, disuélvalo en 100ml de tampón fosfato (PBS) o fenol sin rojo medio, filtrarlo con a 0,22 μ m microporoso membrana para eliminar las bacterias en la solución, guárdelo a 4 y evitar la luz lata. en el proceso de preparación y almacenamiento, es mejor envolver el recipiente con aluminio papel de aluminio.

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