En todo tipo de experimentos con células, proteínas y ADN, una vez que los componentes abandonen el entorno biológico natural, se verán seriamente afectados. Para proporcionarles un buen ambiente natural, se debe utilizar un tampón, tris, fosfato, hepes ( Ácido 4-hidroxietilpiperazineetanosulfónico ), etc ...... entonces, ¿cómo elegir un búfer más adecuado?

echemos un vistazo a los tampones biológicos de uso común, y sus características:

1. tampón fosfato

El tampón fosfato es el tampón más utilizado. Debido a su disociación secundaria, el búfer tiene un amplio rango de ph y puede configurarse con búferes ácidos, básicos y neutros de varios valores de ph:

• preparación de tampón ácido puede utilizar directamente nah ₂ correos ₄ o kh ₂ correos ₄ , el rango de ph es 1 ~ 5;
• tampón alcalino puede utilizar directamente na ₂ hpo ₄ o k ₂ hpo ₄ , el rango de ph es 9 ~ 12;
• tampón neutro contiene concentraciones iguales de nah ₂ correos ₄ y na ₂ hpo ₄ o concentraciones iguales de kh ₂ correos ₄ y k ₂ hpo ₄ soluciones en ph 5.5 ~ 8.5.

2. búfer tris

Tris buffer es ampliamente utilizado en la investigación bioquímica. Es una base débil y se usa generalmente en el rango "neutral". tampón tris-hcl: ph = 7.5 ~ 8.5; tampón tris-fosfato: ph = 5,0 a 9,0.

Además de tris-hcl, tris tiene una variedad de buffers de derivación:

• tbs = tris-hcl + nacl + kcl, comúnmente utilizado para limpiar tejidos inmunocontenidos o membranas de transferencia western en Western blotting;
• tbst = tris-hcl + nacl + tween20, un tampón de membrana comúnmente utilizado en Western Blot;
• te = tris-hcl + edta, que protege contra las bases de ADN y se usa a menudo para la estabilización y el almacenamiento del ADN;
• tae = tris base + ácido acético + edta, que es un sistema tampón ampliamente utilizado en la electroforesis de ADN de segmento corto;
• tbe = trisbase + ácido bórico + edta, adecuado para electroforesis de ADN a largo plazo, y tiene un mejor efecto de separación en fragmentos más pequeños.

3. tampón de glicina

El tampón de glicina tiene una amplia gama de ph y una amplia gama de aplicaciones. el rango de ph es 2.0 ~ 11.0. El sistema y rango de ph más comunes se muestran en la siguiente tabla:

4. tampón hepes

hepes es un tampón anfótero no iónico con buena capacidad de tamponamiento en el rango de ph 7.2 ~ 7.4. Se usa comúnmente en kits de diagnóstico bioquímicos, kits de extracción de ADN / ADN y kits de diagnóstico de PCP.

Tabla 1. Ventajas y desventajas de los buffers de uso común.

Principios generales para la selección de buffers:

(1) lo más importante es determinar el valor de ph requerido por su sistema.

(2) seleccione el sistema de búfer, la capacidad de búfer disminuirá significativamente cuando la pka cambie más de una unidad de ph;

(3) el sistema tampón no debe afectar la actividad de la proteína o la estabilidad del ADN, y evitar la interferencia de otros iones;

(4) finalmente, también debemos considerar el efecto de la temperatura: la temperatura no solo afecta al tampón, sino que también afecta a las células. la mayoría de las células animales tienen un ph de 7.0 a 7.5 a 37 ° C, y cuando la temperatura desciende a 0 ° C, puede llegar a 8.0.

editado por suzhou yacoo science co., ltd.