el enlace disulfuro (-s-s-enlace) es una especie de enlace covalente entre los átomos s. juega un papel importante en la formación de la estructura tridimensional de las moléculas de proteínas. con el fin de identificar la estructura primaria de la proteína, el enlace disulfuro debe abrirse en primer lugar. re tt y tcep-hcl se utilizan comúnmente para reducción del enlace disulfuro , entonces ¿cuál es la diferencia entre ellos?

4 - ditiotreitol (dtt)

dtt es un compuesto en el que los grupos hidroxilo c-1 y c-4 de threitol están sustituidos con grupos sulfhidrilo. se utiliza a menudo en la reducción del enlace disulfuro en la proteína, y puede prevenir la formación de enlaces disulfuro intramoleculares o intermoleculares de cisteína.

dtt tiene dos grupos sulfhydryl, su función puede durar 3 ~ 7 días, y la volatilidad no es fuerte. sin embargo, los enlaces disulfuro incrustados en la estructura proteica (inaccesibilidad del disolvente) a menudo no pueden ser reducidos por dtt. por el contrario, según la velocidad de reducción, se puede juzgar el grado de inclusión del enlace disulfuro. además, ni se puede reducir por dtt. por lo que en la purificación de la proteína marcada con \"su\" utilizando ni columna, el uso de dtt debe ser evitado.

tris (2 - carboxietil) fosfina ( tcep-hcl )

tcep-hcl es el mejor en la derivados trivalentes del fósforo . es una sustancia reductora incolora e insípida que es fácilmente soluble en agua. tiene alta estabilidad en aire y solución acuosa, y ligeramente afectada por la temperatura y la concentración. tcep es un reductor parcial que tiene poca reacción secundaria con otros aminoácidos excepto la cisteína, y puede usarse en condiciones ácidas (incluso ph = 3). tcep tiene las ventajas de alta solubilidad, baja toxicidad, buena estabilidad en solución ácida y alcalina. tiene una capacidad de reducción más fuerte que dtt, y su función puede durar 2 ~ 3 semanas. tcep es reconocido como una buena alternativa a dtt.

dtt y tcep-hcl pueden ser sustituidos entre sí, pero con diferentes efectos. en comparación con dtt, tcep tiene una capacidad de reducción más fuerte, y es más selectivo; tcep es más estable tanto en condiciones ácidas o alcalinas; no tiene ningún costo y no tiene impacto en el experimento de seguimiento. por lo que a menudo se prefiere en la investigación de la proteína química y proteómica.