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preparación del gel tricine-sds-page

2018-04-12 13:01:51

Tricinees un tampón zwitteriónico para bioquímica y biología molecular, con un phrango de buffer de 7.4-8.8. durante sds-page para separar pequeños péptidos, la tricina escomúnmente utilizado en lugar de glicina en el tampón laemmli. gel tricine-sds-pagetiene un rendimiento superior para la identificación de proteínas con moléculaspeso por debajo de 10 kd. mientras que la página de sds convencional se usa para separar estosproteínas, pueden ocurrir algunos problemas, como una tira vaga, gel demasiado suave. aquídescribimos un método de preparación para gel tricine-sds-page.


reactivos:

ánodobuffer (+): 200 mm tris ph = 8.9

catódicobuffer (-): 100 mm tris / 100 mm tricine / 0.1% sds

gelbuffer: 3.0 m tris, ph = 8.45 / 0.3% sds

apiladoacrilamida: 48% de acrilamida / 1,5% de bis-acrilamida

separandoacrilamida: 46,5% de acrilamida / 1,5% de bis-acrilamida

muestrabuffer (20 ml):

5ml de 0,5 m de tris ph = 6,8; 4 ml 20% sds; 1 ml de 2-mercaptoetanol; 4 ml de glicerol al 50%;0,004 g de azul de bromofenol; 6 ml ddh 2 o

Gel de separación:

15%gel: 2 ml separando acrilamida, 2 ml de tampón de gel, 2 ml de glicerol al 50%.

10%gel: 1.22 ml sperating acrylamide, 2 ml gel buffer, 2 ml 50% glicerol y 0.78ml ddh 2 o

ella polimerización se llevó a cabo con 75 ul de persulfato de amonio al 10% (aps) y7.5 ul de tetraetiletilendiamina (temed).

gel de apilamiento:

0.25ml de acrilamida apilable, 0,75 ml de tampón de gel, 2 ml de ddh 2 o, 20 ul 10%aps, 2 ul temed.

elel apilamiento y el gel separador deben polimerizarse al mismo tiempo, yluego vierta el gel de apilamiento sobre el pegamento de separación (verter con cuidado pero rápidamente).

carga de muestra yelectroforesis:

parael minigel, 5-10 ul por pozo da los mejores resultados. coloque las muestras en el pozo con mucho cuidado,y asegúrese de eliminar cualquier acrilamida no polimerizada antes de cargar. despuéscargando la muestra, se estableció una corriente constante de 25-35 ma en la configuración de minigelpara el análisis electroforético. durante la carrera, la espuma aparecerá en la parte superior dese deben agregar el cátodo y el tampón de cátodo adicional.


ella descripción anterior de la preparación del gel tricine-sds-page proporciona unaejemplo para los investigadores. pero en un experimento específico, también es necesarioencontrar un método de preparación adecuado adecuado para el experimento de acuerdo con elsituación actual.


editado por suzhou yacoo science co., ltd

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