en el experimento bioquímico, la solución tampón juega un papel indispensable, puede resistir el efecto de una pequeña cantidad de ácido fuerte y álcali y mantener el valor de pH más cercano al ambiente fisiológico para el sistema. hepes buffer y tris tampón se utilizan comúnmente en los experimentos biológicos buffer, y muchas personas a menudo tienen dudas: ¿cuál es la diferencia entre los dos? este artículo será un resumen comparativo.

introducción y aplicación

hepes es un bio-amortiguador zwitteriónico, perteneciente al tampón del bien, el intervalo de amortiguamiento eficaz es de 6,8 a 8,2, y puede ser ampliamente utilizado como un reactivo tampón en una variedad de reacciones bioquímicas, y algunas células del medio de cultivo. la concentración final de hepes es de 10 ~ 50 mmol / l, el medio de cultivo general que contiene 20 mmol / l puede alcanzar la capacidad de amortiguación. además, los tampones hepáticos se usan comúnmente en orgánulos y proteínas y enzimas con mutabilidad y sensibilidad al pH, así como kits de diagnóstico bioquímico, kits de extracción de ADN / rna y kits de diagnóstico de PCR.

tris es débilmente alcalino, pka es 8,1 a 25 ° c, y el intervalo de amortiguamiento efectivo es de 7,0 ~ 9,2, el pH comúnmente utilizado en experimentos bioquímicos fue de 6,8, 7,4, 8,0, 8,8. se utiliza a menudo como tampón en los experimentos de electroforesis y gel, o como disolventes de ácido nucleico y de proteína, incluso la formación de nematodos intermedios de fibras. sus buffers derivados te, tae, tbe, etc. se usan comúnmente en la estabilidad, almacenamiento y extracción de ADN.

características de los dos amortiguadores

hepes, e incluso todos los buffers de los buenos tienen las siguientes características:

pka valores están entre 6.0 y 8.0;

alta solubilidad en agua;
con impermeabilidad a la membrana, no es fácil penetrar en el biofilm;

el impacto a la reacción bioquímica es limitado, puede ser resistente a la acción química ya la hidrólisis enzimática, y no produce complejos o precipitación con iones metálicos;

la concentración de iones, la composición de la solución y la temperatura tienen poco efecto sobre la disociación;

tris tiene las siguientes características:

afectados por el medio ambiente, en general, cuando la temperatura aumenta 1 ° c, el pH disminuye 0,03; fácil de absorber co2.

método de preparación del tampón

la preparación de la solución tampón de hepes, dependiendo de la aplicación, uno es puro hepes + naoh y el otro es hepes + sal:

hepes 6,5 g, nacl 8,0 g, na2hpo4 \ ​​leq 7h2o 0,198 g, ajustado el pH con solución acuosa de 0,5 m naoh y hacer 500 ml.

hay dos métodos para la preparación de tampón tris-hcl:

en el caso de tampón tris-hcl 0,1 μl / l: se disolvieron 12,11 g de tris base en 950-970 ml de agua desionizada y se añadieron gota a gota 4 n de hCl con agitación para determinar el pH de la solución y luego se añadió agua para hacer es 1l.

en resumen, hepes y tampón tris tienen diferencias en el intervalo de amortiguación, áreas de aplicación, así como las características y métodos de preparación. en el experimento específico, las condiciones experimentales deben analizarse cuidadosamente. Además, debe tenerse en cuenta que en la cromatografía de intercambio iónico, si se usa la columna de intercambio catiónico, se debe evitar el tampón tris debido al transporte de carga positiva, mientras que el hepa pertenece al tampón zwitteriónico, la cautela y la cromatografía de intercambio iónico de aniones son aplicables.