La tricina (CAS: 5704-04-1 ) es un excelente tampón de productos biológicos anfóteros. El objetivo principal de Tricine es inhibir eficazmente las bacterias Gram-positivas, las bacterias Gram-negativas, las levaduras y los mohos, y también es un estabilizador del pH para muchos medios de cultivo de vacunas. La aplicación de Tricine en la vacuna contra la rabia se introduce en la patente CN111840535B, en la que Tricine es un componente del medio de cultivo libre de suero, utilizado principalmente como estabilizador del valor de PH. Esta semana, el editor de YACOO presentó el proceso específico de preparación de la vacuna antirrábica. El proceso específico es el siguiente:

1. Preparación de la solución madre

（1）Cultivo celular: las células Vero se perfundieron en medio sin suero en el biorreactor a 0,6 ~ 0,7 × 10 ⁷ células/ml, iniciar la inoculación del virus, donde el medio de cultivo sin suero de células Vero contiene 2 ～ 4 mmol/L de glutatión, 0,5 ～2,0 g/L de fructosa y 0,5 ～2,0 g/L de tricina.

(2) Inoculación del virus: inocule el virus de la rabia rPV-2061 en las células a 0,0025-0,01 MOI y cultive durante más de 6 horas. Comience a usar la solución de mantenimiento de virus libre de suero para el cultivo de perfusión. La fórmula de la solución de mantenimiento sin suero de células Vero contiene 2 ～ 4 mmol/L de glutatión, 0,5 ～2,0 g/L de fructosa, 0,5 ～2,0 g/L de tricina y 2 ～3 g/L de bicarbonato de sodio.

（3）Recolección de virus: después de la inoculación del virus, el virus se recolectará entre los días 3 y 17 y se obtendrá el líquido de recolección del virus.

（4）Inactivación: use β - Lactona inactiva el virus.

（5）Digestión enzimática: el ADN huésped de las células Vero se digiere con nucleasa

（6）Purificación: purificar el virus mediante cromatografía de tamiz molecular. Después de la purificación, agregue albúmina sérica humana al 3 % (m/v) y maltosa al 5 % (m/v) como estabilizadores para preparar la solución original.

2. Preparación del producto terminado

（1 ） Agregue una cantidad adecuada de agente protector de liofilización como estabilizador para obtener productos semielaborados

（2 ） Los productos semielaborados se transforman en productos terminados después del subenvasado y la liofilización.

El producto de la vacuna contra la rabia en la patente no tiene aditivos como suero bovino, tripsina de origen animal, gelatina y dextrano, y tiene bajos residuos de ADN y proteínas en las células Vero y alta seguridad. Además, la potencia de los productos de vacuna aún se puede mantener por encima de 6,6 UI/dosis después de 28 días a 37 ℃ , con una alta estabilidad térmica. Además, cada tanque de biorreactor de 30L puede producir 160000 agentes, con una alta eficiencia de producción de proceso.

Referencia

CN111840535B Preparación de vacuna antirrábica utilizando células Vero libres de suero y virus de la rabia rPV-2061.