En todo tipo de experimentos con células, proteínas y ADN, una vez que los componentes abandonen el entorno biológico natural, se verán seriamente afectados. Para proporcionarles un buen ambiente natural, se debe utilizar un tampón, tris, fosfato, hepes ( Ácido 4-hidroxietilpiperazineetanosulfónico ), etc ...... entonces, ¿cómo elegir un búfer más adecuado?
echemos un vistazo a los tampones biológicos de uso común, y sus características:
1. tampón fosfato
El tampón fosfato es el tampón más utilizado. Debido a su disociación secundaria, el búfer tiene un amplio rango de ph y puede configurarse con búferes ácidos, básicos y neutros de varios valores de ph:
2. búfer tris
Tris buffer es ampliamente utilizado en la investigación bioquímica. Es una base débil y se usa generalmente en el rango "neutral". tampón tris-hcl: ph = 7.5 ~ 8.5; tampón tris-fosfato: ph = 5,0 a 9,0.
Además de tris-hcl, tris tiene una variedad de buffers de derivación:
3. tampón de glicina
El tampón de glicina tiene una amplia gama de ph y una amplia gama de aplicaciones. el rango de ph es 2.0 ~ 11.0. El sistema y rango de ph más comunes se muestran en la siguiente tabla:
tampón de glicina |
rango de ph |
glicina -hcl |
2.0 ~ 5.0 |
glicina -naoh |
8.0 ~ 11.0 |
glicina -tris |
8.0 ~ 11.0 |
glicinamida buffer |
7.8 ~ 8.8 |
glicilglicina e buffer |
8.0 ~ 9.0 |
4. tampón hepes
hepes es un tampón anfótero no iónico con buena capacidad de tamponamiento en el rango de ph 7.2 ~ 7.4. Se usa comúnmente en kits de diagnóstico bioquímicos, kits de extracción de ADN / ADN y kits de diagnóstico de PCP.
Tabla 1. Ventajas y desventajas de los buffers de uso común.
buffer |
ventajas |
desventajas |
fosfato |
facil de preparar en varias concentraciones amplio rango de ph Ph es menos afectado por la temperatura y concentración |
fácil de formar precipitacion ion Con calcio, magnesio y iones de metales pesados. Inhibir ciertos procesos bioquímicos. |
tris |
alcalino es fuerte; Tiene poca interferencia con los procesos bioquímicos y no precipita con calcio, iones de magnesio e iones de metales pesados. |
El ph se ve muy afectado por la concentración, se diluye 10 veces, el cambio de ph es mayor que 0.1 efecto de gran temperatura, como ph = 8.4 a 4 ° c y ph = 7.4 a 37 ° c Fácil de absorber dióxido de carbono en el aire. Interferencia con algunos electrodos de ph. |
glicina |
Proporciona un entorno natural más cercano para los componentes celulares y diversos extractos. |
similar al sistema de tampón fosfato ; interfiere con ciertos procesos de reacción bioquímica, como los procesos metabólicos; |
hepes |
mantiene un valor de ph constante durante el cultivo abierto o la observación celular y no tiene efectos tóxicos en las células |
Puede ser tóxico para algunas células en altas concentraciones y un poco más caro que otros tampones. |
Principios generales para la selección de buffers:
(1) lo más importante es determinar el valor de ph requerido por su sistema.
(2) seleccione el sistema de búfer, la capacidad de búfer disminuirá significativamente cuando la pka cambie más de una unidad de ph;
(3) el sistema tampón no debe afectar la actividad de la proteína o la estabilidad del ADN, y evitar la interferencia de otros iones;
(4) finalmente, también debemos considerar el efecto de la temperatura: la temperatura no solo afecta al tampón, sino que también afecta a las células. la mayoría de las células animales tienen un ph de 7.0 a 7.5 a 37 ° C, y cuando la temperatura desciende a 0 ° C, puede llegar a 8.0.
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