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preparación de la solución de desarrollo de color bcip / nbt

2018-03-13 13:07:33

bcip / nbt es unode las combinaciones de sustrato para fosfatasa alcalina (ap) y se usa paradetectar antígeno unido a nitrocelulosa u otras membranas. bajo la catálisisde ap, bcip se hidroliza para producir un producto reactivo fuerte que reacciona connbt para formar un producto insoluble de azul oscuro a morado azulado. el correspondientekit se puede utilizar para la reacción cromogénica enzimática de la fosfatasa alcalinasistema en experimentos ihc y wb. bajo la catálisis de ap, un azul profundoel precipitado se genera en el lugar donde el conjugado ap se une alsección de tejido o la membrana de transferencia, y la posición y expresión de lala proteína diana se puede determinar de acuerdo con la reacción de color. el seguimientodescribe brevemente el método de preparación de la solución de coloración bcip / nbt:

preparación de bcip, solución de nbt y tampón

(1) 1l tristampón (0.1 m tris, 0.5 mm cloruro de magnesio, ph = 9.5)

12.1g de Tris y 0,12 g de cloruro de magnesio hexahidratado se agregaron a 800 ml deagua destilada y desionizada (dd h2o). luego, el ph se ajustó a 9.5 conácido clorhídrico y finalmente dd h2o se añadió para obtener 1 l de tampón tris.

(2) solución nbt

0.7ml de dmf y 0,3 ml de dd h2o se mezclaron para dar 1 ml de una solución que contenía70% dmf, y luego 30 mg de nbt se disolvieron en el mismo.

(3) bcipsolución

añadir15 mg de bcip a 1 ml de dmf para obtener una solución de bcip.

preparación de la solución de color bcip / nbt

ella solución de nbt preparada por arriba y la solución de bcip se mezclaron y se agregaron a 100ml de tampón Tris para obtener una solución de desarrollo de color correspondiente.


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